Nachweis von Allergenen mittels real-time PCR

Selbst geringe Spuren von Allergenen in Lebensmitteln führen bei sensibilisierten Menschen zu starken allergischen Reaktionen. Die richtige Kennzeichnung von Produkten zu gewährleisten und Verschleppungen im Produktionsprozess sicher zu erkennen ist heute ein wichtiger Bestandteil der Qualitätssicherung der Lebensmittelindustrie.

 

Auf den ersten Blick scheint die Analyse von Allergenen mittels PCR-Methoden einen Widerspruch in sich darzustellen, da die allergenen Moleküle selbst Proteine sind, PCR-Techniken aber auf der Erbsubstanz, der DNA beruhen. Allerdings schreibt der Gesetzgeber für die Deklaration nicht den Nachweis des allergenen Proteins, sondern der Allergenen Zutat bzw. Substanz vor. Angesichts der Tatsache, dass verschiedene Proteine eines Rohstoffes bei verschiedenen Allergikern die entsprechende Reaktion auslösen können, eine richtige Vorgabe. Für einige allergene Rohstoffe stehen darüber hinaus keine Protein basierten Nachweisverfahren zur Verfügung (z.B. Sellerie).

 

 

Hinzu kommt, dass DNA in behandelten bzw. prozessierten Lebensmitteln ein wesentlich robusteres Zielmolekül für den Nachweis darstellt, als ein bestimmtes Protein. Der Genotyp ist unabhängig von klimatischen, saisonalen und lokalen Einflüssen. Des Weiteren basieren Proteinnachweisverfahren meist auf spezifischen Antikörpern, die gegen ein Epitop des Proteins gerichtet sind. Letzteres kann aber durch Verarbeitungsprozesse denaturiert sein und in Folge dessen vom Antikörper nicht mehr erkannt werden. Davon kann die Allergene Wirksamkeit unangetastet sein. Ein weiterer entscheidender Vorteil der real-time PCR liegt in ihrer höheren Spezifität, die über drei spezifische Moleküle (zwei Primer und eine Sonde) vermittelt wird. Bei Antikörperreaktionen sind Kreuzempfindlichkeiten nicht unüblich. Ein mehr praktischer Pluspunkt ist die identische Aufarbeitung (DNA-Extraktion) einer Probe für die Analyse auf mehrere Allergen-Parameter, wenn die real-time PCR eingesetzt wird.

 

Die real-time PCR liefert prinzipiell ein quantitatives Ergebnis. Um die gemessenen Rohdaten allerdings in eine relevante Einheit transformieren zu können ist ein geeignetes Vergleichsmaterial mit bekannter Konzentration notwendig. Der SureFood® QUANTARD Allergen 40 ist eine solche Referenz und ermöglicht die Quantifizierung von Allergenen mittels real-time PCR.

 

Im Vergleich steht damit die real-time PCR zur Allergenanalytik den Protein detektierenden Methoden in nichts nach.

 

Vorteile des Nachweises von Allergenen mittels Real-time PCR im Überblick:

  • Erfüllt die gesetzlichen Vorgaben: der Rohstoff muss nachgewiesen werden, nicht das Protein
  • Robustes, wenig variables Zielmolekül (DNA) gewährt verlässliche Ergebnisse auch in prozessierten Lebensmittelproben
  • Hochspezifisches System mit äußerst geringer Neigung zu Kreuzreaktionen
  • Sensitivität im „low ppm“ Bereich
  • Ein Extraktionsverfahren für alle Parameter
  • Einfache Handhabung

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